革蘭氏染色試劑盒（Gram Staining Kit）

●  産品組成：

● 産品簡介：

革蘭氏染色法（Gram Stain）是細菌學中廣泛使用的一(yī)種鑒别染色法，通(tōng)過結晶紫初染和碘液媒染後，在細胞壁内形成了不溶于水(shuǐ)的結晶紫與碘的複合物(wù)，革蘭氏陽性菌細胞壁較厚，肽聚糖網層次較多(duō)且交聯緻密，乙醇脫色時，肽聚糖脫水(shuǐ)使孔徑縮小(xiǎo)，故保留結晶紫-碘複合物(wù)在細胞膜上(shàng)，呈紫色。革蘭氏陰性菌細胞壁薄、外膜層類脂含量高(gāo)、肽聚糖層薄且交聯度差，脫色後類脂外膜迅速溶解，縫隙加大，結晶紫與碘複合物(wù)溶出，因此乙醇脫色後再經番紅(hóng)複染，呈紅(hóng)色。

● 貯存和運輸：

常溫保存，有效期一(yī)年(nián)；常溫運輸。

● 操作步驟：

一(yī) 标本處理：

有菌部位的标本，如痰液、糞便、各種拭子、創面等可直接塗片。

無菌部位的标本，如腦(nǎo)脊液、胸水(shuǐ)、腹水(shuǐ)、膽汁、尿液、關節液等，應取适量标本（最高(gāo)可達

5-7 ml）,經 3000rpm 離心 10min，取沉渣塗片染色。

二 塗片制作：

菌液塗片時，用接種環沾取菌液點在載玻片上(shàng)，标本可直接在玻片上(shàng)塗布；菌落塗片時，先取生(shēng)理鹽水(shuǐ)一(yī)滴，置載玻片上(shàng)，用接種針挑取菌落在鹽水(shuǐ)中塗布。制作的塗片應自(zì)然幹燥，并經火焰固定，固定的溫度不宜過高(gāo)，以玻片背面接觸手背不燙為(wèi)準，否則可能(néng)使細菌形态改變。将固定後的塗片進行染色。

三 染色

一(yī)般包括初染、媒染、脫色、複染等四個(gè)步驟，具體操作方法是：

3.1 初染：加上(shàng)結晶紫染色液後，染色 1 分鍾，水(shuǐ)洗。

3.2 媒染：加上(shàng)革蘭氏碘液後染色 1 分鍾，水(shuǐ)洗。

3.3 脫色：加上(shàng)脫色液（95%酒精）,搖動玻片,根據塗片厚度,脫色約 20-60秒(miǎo)，水(shuǐ)洗，吸去水(shuǐ)分。

3.4 複染：加上(shàng)番紅(hóng)染色液後，染色 1 分鍾，水(shuǐ)洗，吸幹或在空氣中涼幹後，油鏡鏡檢。

四 結果：

葡萄球菌：紫色、球形、葡萄狀排列。大腸杆菌：紅(hóng)色、杆狀、散在排列。

          葡萄球菌-革蘭氏陽性菌  紫色                             大腸杆菌-革蘭氏陰性菌 紅(hóng)色

革蘭氏染色的關鍵在于嚴格掌握酒精脫色程度，如脫色過度，則陽性菌可被誤染為(wèi)陰性菌；而脫色不夠時，陰性菌可被誤染為(wèi)陽性菌。此外，菌齡也影響染色結果，如陽性菌培養時間過長(cháng)，或已死亡及部分菌體自(zì)行溶解，都常呈陰性反應。

● 注意事(shì)項：

1．标本塗片不能(néng)太厚，嚴格按操作要求進行。若塗片較厚，應延長(cháng)脫色時間，直至不再出現紫色為(wèi)止。

2．玻片通(tōng)過火焰溫度不能(néng)太高(gāo)。

3．革蘭氏碘液變透明，則不能(néng)使用。

4．水(shuǐ)洗時動作要輕柔,沿載玻片對角線方向用洗瓶沖洗,以免把菌體沖掉。