RealECL發光(guāng)液

● 産品組成：

● 産品簡介：

RealECL 是一(yī)種超敏ECL化學發光(guāng)試劑盒，可與二抗上(shàng)耦連的辣根過氧化物(wù)酶（HRP）發生(shēng)化學反應，發出熒光(guāng)，從(cóng)而可以通(tōng)過用X光(guāng)片壓片或其它适當熒光(guāng)成像設備檢測樣品。RealECL具有極高(gāo)靈敏度和高(gāo)信噪比，可檢測出10-100 fg的微量抗原；發光(guāng)迅速，熒光(guāng)可使X感光(guāng)膠片感光(guāng)達12小(xiǎo)時以上(shàng)，特别适用于痕量蛋白(bái)檢測；另外高(gāo)靈敏度可以大大節省寶貴的樣品以及非常昂貴的一(yī)抗和二抗的用量，降低(dī)實驗成本。

● 貯存：

  2-8℃貯存，有效期一(yī)年(nián)。

● 注意事(shì)項：

1 RealECL A液和B液在吸取過程中必須要更換槍頭，A液和B液相(xiàng)互污染後會(huì)導緻A液或B液逐漸失效，影響後續的使用效果。

2 各溶液使用後，請蓋緊瓶蓋，以防失效。

3 為(wèi)獲得最佳實驗結果，請務必優化實驗條件(jiàn)，包括檢測樣品的用量、一(yī)抗、二抗稀釋度、雜(zá)交膜及封閉試劑的選擇。

4 由于疊氮鈉是HRP抑制劑，在緩沖液中應避免使用疊氮鈉作為(wèi)防腐劑；如果二抗中含有疊氮鈉，發光(guāng)實驗前要進行5次TBST或PBST漂洗，每次10分鍾。

5 在與膜發生(shēng)接觸過程中，請佩戴手套且使用幹淨鑷子等潔淨器(qì)材，避免蛋白(bái)污染産生(shēng)高(gāo)背景。

● 使用說明：

1 RealECL工(gōng)作液的配制：等體積混合适量RealECL A液和B液，室溫放(fàng)置備用。工(gōng)作液宜在臨檢測前配制。

2 Western二抗孵育後，并進行數次洗滌後，用平頭鑷子将膜取出，用濾紙(zhǐ)略吸去過多(duō)的液體(切勿接觸膜的蛋白(bái)面)，但不要使膜過度幹燥，然後将膜平鋪于一(yī)潔淨保鮮膜上(shàng)，避免産生(shēng)氣泡。

注：某些市(shì)售保鮮膜包裹印迹膜時會(huì)淬滅熒光(guāng)，請選擇ECL專用保鮮膜獲得更好的實驗效果。

3 根據膜的大小(xiǎo)，按每平方厘米膜加0.125 ml RealECL工(gōng)作液的比例，滴加RealECL工(gōng)作液到(dào)膜上(shàng)，确保使工(gōng)作液均勻覆蓋在膜上(shàng)，常溫放(fàng)置1-2分鍾。

注：為(wèi)達節約目的可将膜減小(xiǎo)但勿降低(dī)發光(guāng)液用量，确保發光(guāng)液完全覆蓋于膜上(shàng)。

4将保鮮膜折起來完全包裹雜(zá)交膜，去除氣泡和皺褶，可剪去邊緣部多(duō)餘的保鮮膜。用濾紙(zhǐ)吸去多(duō)餘的發光(guāng)工(gōng)作液。用膠帶将覆蓋雜(zá)交膜的保鮮膜固定在暗(àn)盒内。

5在黑(hēi)暗(àn)中放(fàng)入X感光(guāng)膠片，分别曝光(guāng)不同的時間如數秒(miǎo)到(dào)數分鍾，顯影定影觀察沖洗結果。如掌握不好曝光(guāng)時間，可以在膜上(shàng)放(fàng)置3-4張X感光(guāng)膠片，統一(yī)曝光(guāng)3-5分鍾，顯影後選擇一(yī)張曝光(guāng)最好的膠片。

應用示例：

綠蘿總蛋白(bái)，RbcL一(yī)抗 1：2000，羊抗兔IgG-HRP 1：2000

a PVDF膜用抗體清除液處理後再用RealECL曝光(guāng)。