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EB染色液
産品編号
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産品名稱
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包裝
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EB001-04
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EB染色液
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10
ml
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-
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說明書
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一(yī)份
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● 産品簡介:
EB染色液是EB的水(shuǐ)溶液,濃度為(wèi)10mg/ml。EB(溴化乙錠)能(néng)與核酸分子特異結合,用于觀察瓊脂糖或聚丙烯酰胺凝膠中DNA或RNA分子。廣泛應用于核酸電(diàn)泳前後的染色以及流式細胞儀的樣品染色處理等。溴化乙錠(Ethidium Bromide;C21H20N3Br;分子量為(wèi)394.32)含有一(yī)個(gè)可以嵌入DNA 堿基的三環平面基團。它與DNA 的結合沒有堿基序列特異性。大約每2.5 個(gè)堿基插入一(yī)個(gè)溴化乙錠分子。當染料分子插入後,紫外激發後呈現熒光(guāng),可以檢測到(dào)10ng 的DNA 條帶。
● 保存、運輸及效期:
常溫避光(guāng)保存;常溫運輸;有效期兩年(nián)。
● 注意事(shì)項:
EB有一(yī)定毒性,使用時請使用一(yī)次性手套操作,注意防護!
● 使用說明:
使用前,先離心快甩EB溶液至管底,以防開(kāi)蓋後EB造成的污染。
1. 瓊脂糖電(diàn)泳凝膠的制備及染色(預染法):
1. 按照(zhào)所需濃度稱取瓊脂糖,加入TAE或TBE緩沖液,在微波爐中加熱至徹底溶解。
2. 等凝膠溫度降至大約50-60℃以下(xià)時,按照(zhào)稀釋10000倍加入10 mg/ml EB溶液,如100ml凝膠加入EB量為(wèi)10 μl;徹底搖勻後鋪膠并插入梳子。
3. 凝固後,将梳子輕輕拔出。
4. 上(shàng)樣電(diàn)泳,電(diàn)泳結束後紫外觀察。
注:預染法,EB染色會(huì)出現陰陽膠現象,即随著(zhe)電(diàn)泳時間延長(cháng),較小(xiǎo)的片段會(huì)染色不清楚。參見(jiàn)實驗示例。可以将凝膠用後染法染色即可看(kàn)到(dào)小(xiǎo)片段條帶。
2. 瓊脂糖電(diàn)泳凝膠的制備及染色(後染法):
1. 按照(zhào)所需濃度稱取瓊脂糖,加入TAE或TBE緩沖液,在微波爐中加熱至徹底溶解。
2. 等凝膠溫度降至大約50-60℃以下(xià)時,不要加入EB溶液,直接鋪膠并插入梳子。
3. 凝固後,将梳子輕輕拔出。
4. 上(shàng)樣電(diàn)泳。
5. 電(diàn)泳結束後将凝膠浸泡在含有EB的TAE或TBE染色液中(染色液配制:100ml 緩沖液中加入100-200 μl EB溶液,混勻)染色15-20分鍾;TAE或TBE緩沖液中脫色10-15分鍾。
6. 紫外觀察結果。
● 實驗示例: