離心式快速脫鹽柱(5 kD)

● 産品介紹

離心式快速脫鹽柱根據排阻層析原理可以出色地完成蛋白(bái)脫鹽或緩沖液置換，适用于高(gāo)于5 kD蛋白(bái)樣品的脫鹽、緩沖液置換或小(xiǎo)分子去除。該産品回收率高(gāo)，幾乎等體積回收蛋白(bái)樣品，在脫鹽的同時保持高(gāo)回收率，樣品不會(huì)被稀釋。簡單使用離心操作，無需裝柱，代替比較耗時的傳統透析處理，以達到(dào)快速蛋白(bái)樣品脫鹽純化以及替換蛋白(bái)質緩沖液的目的。

脫鹽柱參數如下(xià)：

● 貯存、運輸和效期：

常溫貯存（不能(néng)冷凍）；常溫運輸；有效期兩年(nián)。

● 注意事(shì)項：

1. 操作方便，免去了繁瑣的透析過程，15-20分鍾内即可完成樣品處理。

2. 本脫鹽柱建議一(yī)次性使用，不建議重複使用。

● 操作步驟

1. 取脫鹽柱，放(fàng)入2 ml收集管中。  

2. 加入400 μl滅菌水(shuǐ)或樣品所需的緩沖液，常溫靜(jìng)置5 min，1000×g（約3000 rpm）離心2 min。

注：離心力不要高(gāo)于1000 g，過高(gāo)的離心力會(huì)損傷填料，降低(dī)脫鹽效率。

3. 重複步驟2操作2次。

4. 樣品準備：

樣品在上(shàng)樣前建議離心取上(shàng)清或用0.22 μm或0.45 μm濾膜過濾，減少雜(zá)質影響。

5. 脫鹽處理：

脫鹽柱轉移到(dào)新的1.5 ml離心管中，脫鹽柱中加入100-200 μl需要處理的蛋白(bái)樣品，靜(jìng)置30秒(miǎo)，1000×g（約3000 rpm）離心2 min，收集回收樣品，保存備用。

注：為(wèi)了确保從(cóng)小(xiǎo)體積樣品中獲得最大的蛋白(bái)回收效率，低(dī)于100 μl樣品上(shàng)樣後要在樣品完全吸收後向填料中加入适當體積的超純水(shuǐ)或緩沖液壓層，使得總上(shàng)樣體積為(wèi)100 μl。

● 注意事(shì)項

1. 回收效果：樣品脫鹽後的回收率與樣品的濃度，以及上(shàng)樣體積相(xiàng)關。樣品濃度越高(gāo)，其回收率越高(gāo)；同時在推薦的樣品上(shàng)樣量範圍内，上(shàng)樣量越大，其回收率也會(huì)随之升高(gāo)。通(tōng)常脫鹽後蛋白(bái)的回收率在70-90%。

2. 樣品處理體積要在柱子處理範圍内，該脫鹽柱最多(duō)處理體積是200 μl樣品，過多(duō)會(huì)導緻收集 

管中液體浸沒到(dào)脫鹽柱。

3. 填料在高(gāo)濃度醇溶液或飽和鹽溶液中會(huì)有失水(shuǐ)收縮現象，請勿将上(shàng)述溶液進行過柱；

4. 加樣時盡量均勻加至管中心位置；

5. 當樣品濃度過低(dī)時（<0.01 mg/ml)，需先将樣品濃縮到(dào)所需體積或所需濃度。

● 常見(jiàn)問題

 實驗示例：

          離心式快速脫鹽柱脫鹽處理樣品
樣品1（lane1-5）：細菌裂解物(wù)（正常鹽濃度）
lane1，2，3：細菌裂解物(wù)上(shàng)樣5μl，4μl，3μl；
lane4，5：100μl細菌裂解物(wù)經過脫鹽柱處理後，上(shàng)樣5μl
lane 4：S公司脫鹽柱；lane 5：Real-Times脫鹽柱
結論：脫鹽柱對裂解物(wù)所有蛋白(bái)都有較好的回收率（80%）

樣品2（lane 6-8）：BSA溶液
lane 6: BSA水(shuǐ)溶液（0.4μg/μl）上(shàng)樣量5μl（2μg）
lane 7：BSA 0.5M NaCl溶液（0.4μg/μl）上(shàng)樣量5μl（2μg） 
lane 8：BSA 0.5M NaCl溶液脫鹽柱處理上(shàng)樣量5μl
結論：脫鹽柱脫鹽處理效果明顯（含鹽BSA電(diàn)泳泳道明顯變寬）
           脫鹽後的BSA回收率可達90%

脫鹽程序：脫鹽柱中加入400μl超純水(shuǐ)，常溫靜(jìng)置5min，1000 g
離心3min，重複2次；脫鹽柱放(fàng)入新的1.5ml離心管中，加入0.1ml
細菌裂解物(wù)或0.2ml BSA溶液，靜(jìng)置30S，1000g離心3min。

電(diàn)泳：4-18% RealPAGE預制膠，1×TGS，200V 37-13mA 53min，
FastBlue蛋白(bái)染色液染色30分鍾。