DAPI染色液（DAPI Stain Solution,10 μg/ml）

●  産品組成：

● 産品簡介：

DAPI染色液(DAPI Staining Solution)是适用于常見(jiàn)細胞和組織細胞核染色的染色液。 DAPI即 2-(4-Amidinophenyl)-6-indolecarbamidine dihydrochloride，也稱DAPI dihydrochloride，分子式為(wèi)C₁₆H₁₅N₅? 2HCl ，MW為(wèi)350.25，CAS Number 28718-90-3。

DAPI是一(yī)種可以穿透細胞膜的藍色熒光(guāng)染料，它可以用于活細胞和固定細胞的染色。和EB(ethidium bromide)相(xiàng)比，對雙鏈DNA的染色靈敏度要高(gāo)很多(duō)倍，DAPI和雙鏈DNA結合後可以産生(shēng)比DAPI自(zì)身強20多(duō)倍的熒光(guāng)。 DAPI染色常用于細胞凋亡檢測，染色後用熒光(guāng)顯微鏡觀察或流式細胞儀檢測。DAPI也常用于普通(tōng)的細胞核染色以及某些特定情況下(xià)的雙鏈DNA染色。 DAPI的最大激發波長(cháng)為(wèi)340nm，最大發射波長(cháng)為(wèi)488nm；DAPI和雙鏈DNA結合後，最大激發波長(cháng)為(wèi)364nm，最大發射波長(cháng)為(wèi)454nm。 DAPI的發射光(guāng)為(wèi)藍色，且DAPI和綠色熒光(guāng)蛋白(bái)GFP或Texas Red染劑(紅(hóng)色熒光(guāng)染劑)的發射波長(cháng)僅有少部分重疊，可以利用這項特性在單一(yī)的樣品上(shàng)進行多(duō)重熒光(guāng)染色。

本DAPI染色液為(wèi)即用型，濃度為(wèi)10μg/ml，可以直接用于固定細胞或組織的細胞核染色。

● 貯存：

-20℃避光(guāng)保存，一(yī)年(nián)有效。

● 操作步驟：

一(yī) 懸浮細胞染色

1.1 500 g（2400 rpm，下(xià)同）離心收集細胞樣品于1.5 ml離心管内，加入0.5 ml固定液（貨号：KA5010，卡諾固定液），緩緩懸起細胞，常溫固定10分鍾或更長(cháng)時間(可4℃過夜)。

1.2離心去盡固定液，用PBS洗兩遍，每次3分鍾，洗滌期間手動晃動數次。

1.3 細胞沉澱中加入200 μl DAPI染色液，重懸細胞，37℃避光(guāng)染色10-15分鍾，手動晃動數次。

1.4 離心收集沉澱，重懸于100 μl 1×PBS中。

1.5 取5 μl抗熒光(guāng)淬滅封片液（貨号：AM0510）于載玻片上(shàng)，加入等體積步驟1.4染色後細胞重懸液，蓋上(shàng)一(yī)潔淨的蓋玻片，盡量避免氣泡。

1.6 熒光(guāng)顯微鏡下(xià)紫外激發觀察可檢測到(dào)呈藍色的細胞核。

注：熒光(guāng)染料都存在淬滅的問題，建議染色後盡快檢測。

二 貼壁細胞染色

2.1 取潔淨蓋玻片在70%乙醇中浸泡5分鍾或更長(cháng)時間，無菌超淨台内吹幹或用無菌的PBS洗滌三遍，再用細胞培養液洗滌一(yī)遍。将蓋玻片置于六孔闆内，種入細胞培養過夜，生(shēng)長(cháng)至50%-80%滿度。

2.2刺激細胞發生(shēng)凋亡後，吸盡培養液，加入0.5 ml固定液，固定10分鍾或更長(cháng)時間(可4℃過夜)。

2.3去盡固定液，用PBS洗兩遍，每次3分鍾，吸盡液體。洗滌時宜用搖床或手動晃動。

2.4加入0.5 ml DAPI染色液，37℃避光(guāng)染色10-15分鍾，手動晃動數次。

2.5去盡染色液，用PBS洗兩遍，每次3分鍾，吸盡液體。洗滌時宜用搖床或手動晃動。

2.6滴一(yī)滴抗熒光(guāng)淬滅封片液（貨号：AM0510）于載玻片上(shàng)，蓋上(shàng)貼有細胞的蓋玻片，讓細胞接觸封片液，盡量避免氣泡。

2.7熒光(guāng)顯微鏡下(xià)紫外激發觀察可檢測到(dào)呈藍色的細胞核。

注：熒光(guāng)染料都存在淬滅的問題，建議染色後盡快檢測

實驗示例：

操作流程：使用不同濃度星飽菌素（Staurosporine，STS）凋亡處理Jurkat細胞。調整細胞密度為(wèi)1×10⁶/ml，每孔2 ml接種于六孔闆中；加入終濃度為(wèi)0，0.1，0.5，1 μM STS，37℃ 5%CO₂培養3小(xiǎo)時；500 g 3 min收集細胞；細胞沉澱中加入1 ml固定液，常溫固定10 min；1×PBS漂洗兩次；細胞沉澱中加入0.5 ml DAPI染色液，37℃避光(guāng)染色10 min；離心後細胞沉澱重懸于100 μl 1×PBS中；取5 μl細胞懸液滴于載玻片上(shàng)，加5 μl 抗熒光(guāng)淬滅劑，封片觀察。