10×CAPS轉膜緩沖液
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産品編号
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産品名稱
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規格
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CP5015
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10×CAPS轉膜緩沖液
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500 ml
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● 簡介：
10×CAPS轉膜緩沖液（10×CAPS Transfer Buffer）适用于蛋白(bái)電(diàn)泳後凝膠上(shàng)蛋白(bái)的轉膜，主要成分為(wèi)CAPS[3-（環己氨基）-1-丙磺酸]。本轉膜液配制便捷，稀釋後無需調節pH值，pH約為(wèi)11.0。由于緩沖液具有較高(gāo)的pH，特别适合于堿性蛋白(bái)非變性電(diàn)泳後的轉膜實驗。另外，由于緩沖液中不含有甘氨酸，轉膜後的蛋白(bái)可以進行N端測序。
該緩沖液最終可配成至少5升即用型1×緩沖液（根據需求補加甲醇）。
● 保存和運輸：
4℃保存，常溫運輸，一(yī)年(nián)有效；配成1×含甲醇溶液後4℃貯存，1個(gè)月(yuè)有效。
● 配制方法：
将10×轉膜緩沖液稀釋10倍，根據實驗需求加或不加甲醇，即配成1×即用型轉膜緩沖液。
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1×即用型轉膜緩沖液
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500 ml
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1 L
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2 L
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10×轉膜緩沖液
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50 ml
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100 ml
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200 ml
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超純水(shuǐ)
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350 ml
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700 ml
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1400 ml
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無水(shuǐ)甲醇
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50 ml
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100 ml
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200 ml
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不用調節pH
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注：非變性蛋白(bái)電(diàn)泳轉膜不加或少加甲醇；變性蛋白(bái)電(diàn)泳轉膜可以加終濃度低(dī)于10%甲醇。
● 使用方法：
1. 轉膜方法：使用CAPS轉膜緩沖液，電(diàn)泳後的轉膜建議用濕轉法。
2. 膜的選擇：轉膜可以使用PVDF膜和NC膜。根據蛋白(bái)大小(xiǎo)選擇膜的孔徑。一(yī)般說來，大于20 kD蛋白(bái)選擇0.45 μm孔徑，低(dī)于20 kD選擇0.22 μm孔徑。PVDF膜使用前要用無水(shuǐ)甲醇潤濕活化。
3. 三明治結構：轉膜三明治結構與傳統轉膜相(xiàng)同，即根據“黑(hēi)膠白(bái)膜”制作三明治，即膜置于轉膜夾芯正極一(yī)側，凝膠置于轉膜夾芯負極一(yī)側，這樣凝膠上(shàng)帶負電(diàn)荷的蛋白(bái)才能(néng)轉移到(dào)膜上(shàng)。
蛋白(bái)轉膜三明治制作：
負極（電(diàn)轉夾黑(hēi)色面）-海綿墊-1層1 mm厚度濾紙(zhǐ)-凝膠-膜-1層1 mm厚度濾紙(zhǐ)-海綿墊-正極（電(diàn)轉夾白(bái)色面）
4. 轉膜條件(jiàn)：
以下(xià)轉膜條件(jiàn)僅供參考，客戶針對自(zì)己的目的蛋白(bái)大小(xiǎo)，最好經過1-2次預實驗後，确定最佳的轉膜條件(jiàn)。
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蛋白(bái)大小(xiǎo)
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穩流
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建議時間
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降溫措施
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低(dī)于70kD
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150 mA
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1 小(xiǎo)時
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不需要
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70-300 kD
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200 mA
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1.5-2 小(xiǎo)時
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需要
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高(gāo)于300 kD
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200 mA
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2.5-3.5 小(xiǎo)時
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需要
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5. 進行後續WB操作：封閉-一(yī)抗-二抗-檢測。