10×酸性蛋白(bái)Native PAGE轉膜緩沖液

簡介：

10×酸性蛋白(bái)Native PAGE轉膜緩沖液适用于酸性蛋白(bái)電(diàn)泳後凝膠上(shàng)非變性酸性蛋白(bái)的轉膜。本轉膜液配制便捷，稀釋後無需調節pH值，pH約為(wèi)9.2。緩沖液主要成分為(wèi)Tris，甘氨酸和微量SDS。該緩沖液最終可配成10升即用型1×緩沖液（要補加甲醇）。

保存條件(jiàn)：

粉末裝常溫保存，兩年(nián)有效。

配制方法：

将10×轉膜緩沖液粉末全部溶解于1升超純水(shuǐ)中，徹底溶解，即配成10×轉膜緩沖液。根據下(xià)表配制成1×即用型轉膜緩沖液

使用方法：

1. 酸性蛋白(bái)非變性電(diàn)泳：

各種蛋白(bái)質分子由于所含的堿性氨基酸和酸性氨基酸的數目不同，因而有各自(zì)的等電(diàn)點。凡堿性氨基酸含量較多(duō)的蛋白(bái)質稱為(wèi)堿性蛋白(bái)，等電(diàn)點偏堿性，pI＞7，如組蛋白(bái)、精蛋白(bái)等。反之，凡酸性氨基酸含量較多(duō)的蛋白(bái)質，等電(diàn)點就(jiù)偏酸性，pI＜7，自(zì)然界中大多(duō)數蛋白(bái)都是酸性蛋白(bái)。分離堿性蛋白(bái)時候，要利用低(dī) pH 凝膠系統，分離酸性蛋白(bái)時候，要利用高(gāo) pH 凝膠系統。酸性蛋白(bái)通(tōng)常在非變性凝膠電(diàn)泳中采用的 pH 是 8.8的緩沖系統，蛋白(bái)會(huì)帶負電(diàn)荷，蛋白(bái)會(huì)相(xiàng)陽極移動；而堿性蛋白(bái)通(tōng)常電(diàn)泳是在微酸性環境下(xià)進行，蛋白(bái)帶正電(diàn)荷，這時候需要将陰極和陽極倒置才可以電(diàn)泳。酸性蛋白(bái)電(diàn)泳可參考使用非變性PAGE凝膠制備及電(diàn)泳試劑盒（貨号:RTD6130）。

2. 轉膜：

 ① 轉膜方法：酸性蛋白(bái)在非變性狀态的轉膜建議用濕轉法。

 ② 三明治結構：由于酸性蛋白(bái)pI＜7 在堿性轉膜緩沖液中帶負電(diàn)荷，轉膜三明治結構與傳統轉膜相(xiàng)同，即根據“黑(hēi)膠白(bái)膜”制作三明治，即膜置于轉膜夾芯正極一(yī)側，凝膠置于轉膜夾芯負極一(yī)側，這樣凝膠上(shàng)帶負電(diàn)荷的酸性蛋白(bái)才能(néng)轉移到(dào)膜上(shàng)。

酸性蛋白(bái)轉膜三明治制作：

負極（電(diàn)轉夾黑(hēi)色面）-海綿墊-3至5層濾紙(zhǐ)-凝膠-膜-3至5層濾紙(zhǐ)-海綿墊-正極（電(diàn)轉夾白(bái)色面）

 ③ 膜的選擇：膜可以用PVDF膜或NC膜，根據蛋白(bái)大小(xiǎo)選擇膜的孔徑。一(yī)般說來，大于20kD蛋白(bái)選擇0.45μm孔徑，低(dī)于20kD選擇0.22μm孔徑。PVDF膜使用前要用無水(shuǐ)甲醇潤濕活化，NC膜隻需用轉膜緩沖液潤濕就(jiù)可以。

④ 轉膜條件(jiàn)：

由于在非變性條件(jiàn)下(xià)，不同酸性蛋白(bái)的空間結構，聚合狀态，電(diàn)荷數量都有不同，以下(xià)轉膜條件(jiàn)僅供參考，客戶針對自(zì)己的目的蛋白(bái)，最好經過1-2次預實驗後，确定最佳的轉膜條件(jiàn)。