細胞凋亡與壞死檢測試劑盒
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貨号
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名稱
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規格
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AH1060
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細胞凋亡與壞死檢測試劑盒
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100次
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● 産品組成：
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組分貨号
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名稱
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規格
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貯存
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AH1060-01
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細胞染色緩沖液
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100
ml
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4℃
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AH1060-02
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Hoechst
33342染色液
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0.5
ml
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-20℃
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AH1060-03
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PI染色液
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0.5
ml
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-20℃
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說明書
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一(yī)份
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● 産品簡介：
細胞凋亡與壞死檢測試劑盒(Apoptosis and Necrosis
Assay Kit)可以快速檢測細胞凋亡與細胞壞死。本試劑盒采用Hoechst 33342和碘化丙啶(Propidium Iodide，PI)雙染的方法。細胞發生(shēng)凋亡時，染色質會(huì)固縮。Hoechst 33342可以穿透細胞膜，染色後凋亡細胞熒光(guāng)會(huì)比正常細胞明顯增強。碘化丙啶(PI)不能(néng)穿透細胞膜，對于具有完整細胞膜的正常細胞或凋亡細胞不能(néng)染色。而對于壞死細胞，其細胞膜的完整性喪失，碘化丙啶(PI)可以染色壞死細胞。上(shàng)述兩種染料雙染後，使用流式細胞儀或熒光(guāng)顯微鏡檢測時，正常細胞為(wèi)弱紅(hóng)色熒光(guāng)＋弱藍色熒光(guāng)，凋亡細胞為(wèi)弱紅(hóng)色熒光(guāng)＋強藍色熒光(guāng)，壞死細胞為(wèi)強紅(hóng)色熒光(guāng)＋強藍色熒光(guāng)。
按照(zhào)每個(gè)樣品細胞數量100萬計算(suàn)，該試劑盒可以使用100次。
● 貯存：
避光(guāng)按照(zhào)标簽溫度保存，一(yī)年(nián)有效。
● 操作步驟：
一(yī). 貼壁細胞：
1.1在培養液中（細胞數量控制在106以内）均勻滴加适量的Hoechst 33342染色液和PI染色液，輕柔混勻。例如對于十二孔闆中培養的貼壁細胞，每孔有1 ml的培養液，每孔需要加入5 μl Hoechst 33342染色液和5 μl PI染色液。培養液中的血清、酚紅(hóng)等都不會(huì)對染色産生(shēng)幹擾。
1.2混勻，37℃培養15分鍾，直接在顯微鏡下(xià)觀察；如果考慮到(dào)液體對拍照(zhào)的乙酰個(gè)，可以吸除含染料的培養液，用染色緩沖液洗滌2-3次即可在熒光(guāng)顯微鏡下(xià)觀察。
注：為(wèi)避免凋亡細胞随培養液或染色緩沖液被吸除，在吸除液體前，對于用多(duō)孔闆中培養的細胞，最好用多(duō)孔闆離心機(jī)離心一(yī)下(xià)以充分沉澱那些已經漂浮起來的凋亡細胞。
二. 懸浮細胞：
2.1 在懸浮細胞培養液中加入适量的Hoechst
33342染色液和PI染色液，輕柔混勻。例如對于十二孔闆中培養的懸浮細胞，每孔有1 ml的培養液，每孔需要加入5 μl Hoechst 33342染色液和5 μl PI染色液。培養液中的血清、酚紅(hóng)等都不會(huì)對染色産生(shēng)幹擾。
2.2混勻，37℃培養15分鍾，将細胞轉移到(dào)1.5 ml離心管中，500 g 離心5分鍾收集細胞。
2.3細胞沉澱用細胞染色緩沖液洗兩遍，每次3分鍾，吸盡液體。洗滌時宜用搖床或手動晃動。
2.4細胞沉澱中加入100 μl 細胞染色緩沖液，重懸沉澱。
2.5取5 μl抗熒光(guāng)淬滅封片液于載玻片上(shàng)，加入等體積步驟2.4染色後細胞重懸液，蓋上(shàng)一(yī)潔淨的蓋玻片，盡量避免氣泡。
2.6 熒光(guāng)顯微鏡下(xià)觀察。
注：熒光(guāng)染料都存在淬滅的問題，建議染色後盡快檢測。
實驗示例：
293 細胞Hoechst/PI雙染檢測
操作程序：293細胞胰酶消化後調整細胞密度為(wèi)1×105/ml。接種到(dào)12孔闆，1ml每孔，37度5%二氧化碳培養40小(xiǎo)時，加入5 μl Hoechst 33342染色液和5 μl 碘化丙啶染色液，37度培養15分鍾，熒光(guāng)顯微鏡觀察（40×）。