氨苄青黴素溶液(100 mg/ml)

● 産品包裝：

● 産品簡介：

氨苄青黴素(Ampicillin, Amp)又(yòu)稱安比西(xī)林、氨苄西(xī)林，是一(yī)種β-内酰胺類抗生(shēng)素,幹擾肽聚糖的交聯從(cóng)而抑制細菌細胞壁的合成。氨苄青黴素時常被用于分子生(shēng)物(wù)學實驗研究中，如用于配制含氨苄青黴素的LB培養基或LB平闆等。氨苄青黴素溶液已經0.22 μm過濾除菌，可以直接添加到(dào)培養基中。一(yī)般推薦工(gōng)作濃度為(wèi)50～100 μg/ml。

本氨苄青黴素溶液已經優化溶解液，可以保持溶液在-20℃下(xià)基本不結冰，方便使用的同時降低(dī)了反複凍融對抗性的影響。

● 貯存、效期及運輸：

-20℃保存；有效期6個(gè)月(yuè)；濕冰運輸。

● 使用方法：

1. 取出-20℃保存的氨苄青黴素溶液，常溫徹底溶化，完全混勻。

注：溶液在-20℃下(xià)基本為(wèi)流動性溶液，如有冰晶形成，常溫徹底溶化後使用。

2.一(yī)般Amp在LB中終濃度為(wèi)50～100 μg/ml。可以大體按照(zhào)1/1000 LB體積加入100 mg/ml Amp溶液，如100 ml LB中加入50-100 μl Amp 100 mg/ml。

注：氨苄青黴素對高(gāo)溫敏感，要等待LB瓊脂溫度低(dī)于55℃後再加入氨苄溶液。

  3. 在所有的細菌篩選抗生(shēng)素中，氨苄青黴素的穩定性最為(wèi)不佳，參照(zhào)下(xià)表确定使用的效期：

● 注意事(shì)項：

1. 衛星菌落：LB氨苄瓊脂平闆培養時間過長(cháng)時，會(huì)發現一(yī)個(gè)大菌落的周圍會(huì)出現一(yī)些小(xiǎo)的菌落，這些小(xiǎo)的菌落稱為(wèi)衛星菌落（satellite colony）。原因：氨苄青黴素可以被β-内酰胺酶（β-lactamase）水(shuǐ)解。平闆上(shàng)的細菌産生(shēng)的β-内酰胺酶分泌到(dào)細胞外，随著(zhe)細菌的生(shēng)長(cháng)，培養基中的β-内酰胺酶會(huì)不斷增加，這時培養基内氨苄青黴素會(huì)被降解，因此沒有氨苄抗性質粒的小(xiǎo)菌群則環繞大菌落生(shēng)長(cháng)，産生(shēng)衛星菌落。衛星菌落沒有氨苄抗性，挑取單菌落時，不要挑取衛星菌落培養。

2. 質粒丢失：氨苄抗性細菌在傳代的時候，會(huì)出現質粒丢失，傳代次數越多(duō)，質粒丢失的可能(néng)性越大。對于其他抗生(shēng)素如氯黴素，細菌如果丢失了部分帶抗性的質粒，該菌在含有氯黴素的培養基中是不會(huì)生(shēng)長(cháng)的。但是對于氨苄則不然，在液體培養液中，培養時間過長(cháng)的培養基中氨苄的濃度會(huì)降低(dī)，丢失了一(yī)部分質粒的細菌也可以在其中生(shēng)長(cháng)。因此對于使用氨苄作為(wèi)抗性标記的克隆，每隔一(yī)段時間需要檢查細菌質粒丢失情況。比較直觀的辦法就(jiù)是通(tōng)過SDS-PAGE，如果發現蛋白(bái)質的表達水(shuǐ)平降低(dī)了，很大可能(néng)是因為(wèi)質粒丢失了，此時需要重新轉化重組載體。

3. 不要使用配制時間過長(cháng)或超過效期的氨苄溶液。氨苄存儲時間過長(cháng)或者保存不當，很有可能(néng)發生(shēng)降解。

4. 液體培養建議：在液體培養中，不要讓細菌長(cháng)到(dào)過飽和，在LB培養基中，OD₆₀₀絕對不能(néng)超過3。如果是擴大培養，可以先把初始培養液内細菌沉澱，然後利用新鮮的培養液重懸，再進行下(xià)一(yī)步的培養，這樣可以大大減少β-内酰胺酶在液體中的含量。